時間：2023-03-01 16:26:21
緒論：在尋找寫作靈感嗎？愛發(fā)表網(wǎng)為您精選了8篇制作邀請函，愿這些內(nèi)容能夠啟迪您的思維，激發(fā)您的創(chuàng)作熱情，歡迎您的閱讀與分享！
I'm Li Hua,the leader of the paper-cutting club in our school.l remember you were interested in Chinese traditional culture.now I'm glad to tell you there will be a Chinese paper-cutting exhibition which is held by our school.This is a good chance to have a full understanding about Chinese traditional culture.l really hope you can leave some time for the art feast.
The exhibition will take place in our school hall from 2 to 5 in the afternoon on June 21st. And the theme of the exhibition is "beauty of china".Not only our club 's works will be displayed,but also will we have a valuable set of paper-cutting which is created by a famous artist of this field.what's more,there will be a lot of interesting activities,from which you can know more about Chinese culture.
I would appreciate it if you could accept my invitation.l'm sure this exhibiting will leave you a wonderful impression!Looking forward to your reply.
Beat wishes!
摘 要：目的：探討中藥復(fù)方大補(bǔ)陰湯含藥血清對人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞的生長抑制作用。方法：將小鼠隨機(jī)分為正常組、生理鹽水組和大補(bǔ)陰湯組，連續(xù)灌胃給藥7天后，眼眶取血，分離血清；生物倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法檢測大補(bǔ)陰湯含藥血清對人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞的生長抑制作用。結(jié)果：大補(bǔ)陰湯作用H460細(xì)胞48h和72h以后，可見部分細(xì)胞變圓，體積變小，有凋亡小體產(chǎn)生。大補(bǔ)陰湯可時間依賴性抑制H460細(xì)胞的生長。結(jié)論：中藥復(fù)方大補(bǔ)陰湯含藥血清可以抑制H460細(xì)胞的增殖，為進(jìn)一步探討其抗腫瘤作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
關(guān)鍵詞：大補(bǔ)陰湯；血清藥理；H460細(xì)胞
大補(bǔ)陰湯為補(bǔ)益類中藥復(fù)方，該方出自《丹溪心法》，是滋陰降火的代表方劑。全方由熟地黃、龜板、知母、黃柏和豬脊髓組成。臨床常用于相應(yīng)的氣虛陰虛病證，體內(nèi)用藥多起到滿意的療效。近年來的臨床實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)。其對慢性再生障礙性貧血、頑固性失眠、出血性疾病及惡性腫瘤等疾病具有較好的治療作用。本實(shí)驗(yàn)引入血清藥理學(xué)方法(即體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)結(jié)合的一種方法)，用服藥后的小鼠血清(含藥血清)代替中藥煎劑作用于體外細(xì)胞，研究中藥復(fù)方大補(bǔ)陰湯含藥血清對人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞的生長抑制作用。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1．1 藥品與僅器二氧化碳培養(yǎng)箱(HH?CP－1，上海)，生物倒置顯微鏡(AE20，Mode)，96孔培養(yǎng)板(Nune，Roskil-如，Denmark)，胎牛血清(天津?yàn)柹镌噭┕?，RPMI一1640培養(yǎng)基(GIBCO)，甲基噻唑藍(lán)(MTT)，二甲基亞砜(DMSO)。熟地黃、龜板、知母、黃柏(購自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥局)，豬脊髓(購自家樂福超市)。
1．2 實(shí)驗(yàn)動物昆明種小鼠30只(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)，雌雄各半，體重18-22g。
2 方法
2．1 細(xì)胞培養(yǎng)人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞株(Ameri-can Type Culture Collection)，細(xì)胞單層接種在含5％胎牛血清，2％谷氨酰胺，RPMI-1640培養(yǎng)液中，在溫度為37℃，C02濃度為5％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2．2 中藥復(fù)方液的制備大補(bǔ)陰湯(熟地黃15g，龜板15g，黃柏9g，知母各9g，豬脊髓)，上述中藥復(fù)方藥物成分，加水煎煮兩遍，合并兩次濾液，濃縮至每毫升含原中藥復(fù)方成分生藥1g。置4℃冰箱保存儲備。
2．3含藥血清的制備昆明種小鼠30只，雌雄各半，體重18～22g。共分為3組，每組10只，雌雄各半，即空白組、鹽水組和大補(bǔ)陰湯組。連續(xù)7天灌胃給藥，每日1次，每次每只0.4mL/10g。上述連續(xù)灌胃7天的小鼠，于眼眶取血，靜置后離心分離血清10min(2000r/min)，56℃水浴滅活30min，經(jīng)0.221xm微孔濾器過濾除菌(按1：9的比例將培養(yǎng)液加入原血清中)后，凍存?zhèn)溆谩?/p>
2．4 細(xì)胞生長抑制實(shí)驗(yàn)取處于對數(shù)生長期的H460細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為5×104/mL，以每孔100μL接種于96孔板。置于5％CO2、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，吸出培養(yǎng)液，分別加入培養(yǎng)液、鹽水、大補(bǔ)陰湯的含藥血清液，每組重復(fù)3個孔。之后繼續(xù)置于5％C02、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，加藥作用12、24、36和48h后，每孔加入10μL MTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄上清，每孔加入100μL DMSO溶解，酶標(biāo)儀492nm檢測，繪制時效曲線。
抑制率(％)=[A492(陰性對照)-A492(大補(bǔ)陰湯)]/A492(陰性對照)×100％
2．5 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化每瓶1×106個細(xì)胞的密度接種于50mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)24h后加入大補(bǔ)陰湯含藥血清，分別于作用0、12、24、36和48h后用生物倒置顯微鏡觀察。
3 結(jié)果
3．1 大補(bǔ)陰湯對H460細(xì)胞的生長抑制作用 大補(bǔ)陰湯于不同時間作用于H460細(xì)胞后，鹽水組細(xì)胞的存活率隨時間的增加而增加，而大補(bǔ)陰湯組細(xì)胞的存活率隨時間的增加而減少。可見大補(bǔ)陰湯含藥血清對H460細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用并呈明顯的時間依賴性。
3．2 細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察光學(xué)顯微鏡觀察，與正常對照組細(xì)胞相比，大補(bǔ)陰湯作用于H460細(xì)胞48h后，部分細(xì)胞變圓，體積變小，少量細(xì)胞表面發(fā)芽，細(xì)胞變成不規(guī)則狀，芽脫落后形成凋亡小體，凋亡小體呈圓形或橢圓形，在凋亡小體內(nèi)可見高度濃縮的染色質(zhì)輪廓，作用72h后，可觀察到凋亡的H460細(xì)胞數(shù)量增多，少部分細(xì)胞脫落，漂浮于培養(yǎng)液中，亦有少數(shù)細(xì)胞體積增大，細(xì)胞腫脹、破裂，呈壞死狀。
4 討論
關(guān)鍵詞：炙甘草湯；含藥血清；膀胱平滑肌
中圖分類號：R2855文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1007-2349（2017）05-0021-05
[WT5HZ][JZ]Effect of Zhigancao Decoction Containing Serum on Rabbit’s Isolated Vascular Smooth Muscle
[WT5BZ][JZ]HAI Qing-shan， YANG Yu-qing， MENG Zo-ran， RU Jing， JIN Ya-ju
[WT5"BX][JZ]（1. School of Basic Medical Sciences， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan； [JZ]2. School of Acupuncture and Massage Rehabilitation， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan）
[WT5HZ]【Abstract】[WTBZ]Objective： To observe the effect of Zhigancao Decoction containing serum on the movement of bladder smooth muscle in normal rabbits and to explore its mechanism. Methods： The activity of bladder smooth muscle in rabbits was recorded by using Powerlab biological signal system. The effects of different concentrations of Zhigancao Decoction on contraction intensity， the contraction frequency and activity of bladder smooth muscle were observed. Results： Compared with the blank control group， the blank serum group and groups of different concentration of Zhigancao Decoction containing serum could increase the contraction intensity of the bladder smooth muscle （the low concentration serum group， P
42炙甘草湯含藥血清對兔膀胱平滑肌收縮頻率的作用如圖2所示，與空白對照組比較，僅低濃度炙甘草湯含藥血清組有明顯的增加膀胱平滑肌收縮頻率的作用。在低濃度含藥血清作用的基礎(chǔ)上，分別用維拉帕米、阿托品和普萘洛爾阻斷鈣通道、M和β受體。結(jié)果顯示，阿托品則對膀胱平滑肌的收縮頻率具有降低的效果，說明炙甘草湯含藥血清增加膀胱平滑肌頻率的作用與M受體有關(guān)。M毒蕈堿型受體廣泛的存在與平滑肌中，M受體興奮時可引起平滑肌收縮頻率增加。但排除空白血清自身的作用后，低濃度含藥血清組增加膀胱平滑肌收縮頻率的作用就不具有統(tǒng)計學(xué)意義了。說明血清中含有興奮M受體的生物活性成分，如乙酰膽堿（Ach）等，可以引起類似的增強(qiáng)膀胱平滑肌收縮頻率的作用。炙甘草湯能否誘導(dǎo)血清中Ach或類似Ach的活性成分的增加，尚無確切的依據(jù)。
43炙甘草湯含藥血清對兔膀胱平滑肌活動力的作用如圖3所示，膀胱活動力疊加了收縮強(qiáng)度和收縮頻率兩個影響因素。低、中濃度炙甘草湯含藥血清組均顯示出增加膀胱平滑肌活動力的作用。排除空白血清自身作用后，低濃度含藥血清依然可增強(qiáng)膀胱平滑肌的活動力。以低濃度含藥血清組作對照，維拉帕米和阿托品均能夠阻斷低濃度炙甘草湯血清的興奮作用。說明，炙甘草湯低濃度含藥血清對膀胱平滑肌的興奮作用可能通過兩條途徑有關(guān)，一方面興奮鈣通道，增加Ca2+內(nèi)流，增加膀胱平滑肌收縮強(qiáng)度；另一方面興奮M受體，增加膀胱平滑肌收縮頻率。但其興奮作用沒有濃度依賴性的增加，可能與其雙向調(diào)節(jié)作用有關(guān)[1]。說明在劑量增加的情況下誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)發(fā)生了變化，興奮作用反而減弱。[KG）]
5結(jié)論
低濃度炙甘草湯含藥血清組對膀胱平滑肌條具有興奮作用，隨著劑量的增加其興奮作用反而減弱，這與劑量增加的情況下誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)發(fā)生變化有關(guān)。炙甘草含藥血清對增加膀胱平滑肌收縮強(qiáng)度和收縮頻率的單一影響不確定，但疊加收縮強(qiáng)度和頻率兩種因素后，低濃度炙甘草湯含藥血清對膀胱的興奮作用確切。通過添加阻斷劑反向證明，炙甘草湯低濃度含藥血清對膀胱平滑肌的興奮作用可能與興奮鈣通道和M受體兩條途徑有關(guān)。該機(jī)制可能是炙甘草湯對各系統(tǒng)平滑肌作用的共性基礎(chǔ)[4-5]。炙甘草湯興奮鈣通道是通過哪些中間產(chǎn)物[FL）][SD1，1][FQ（11*3/2。175mm，X，DY-W][SQ+1mm][CD=175mm]發(fā)揮作用，興奮M受體的作用是否與Ach相關(guān)，其雙向調(diào)節(jié)作用的機(jī)制與誘導(dǎo)血清內(nèi)成分改變的關(guān)系等，還有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。[KH*1D]
參考文獻(xiàn)：
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[7]段富津方劑學(xué)[M].第6版上海：科學(xué)技術(shù)出版社，2000：135-136[ZK）]
【關(guān)鍵詞】 內(nèi)質(zhì)網(wǎng); 衣霉素; 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78; 凋亡促進(jìn)因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白; 小鼠
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum， ER）廣泛存在于真核細(xì)胞中，是蛋白質(zhì)合成、折疊、運(yùn)輸以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子儲存的主要場所。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子紊亂和未折疊蛋白質(zhì)蓄積可引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress， ERS），發(fā)生具有保護(hù)作用的未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response， UPR）。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激直接影響應(yīng)激細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸，如修復(fù)、損傷或凋亡。神經(jīng)系統(tǒng)許多疾病與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)。最近的研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡信號傳導(dǎo)途徑可能與阿爾茨海默病（Alzheimer disease， AD）的發(fā)病有關(guān)。本研究觀察滋補(bǔ)脾陰方藥（Zibu Piyin Recipe， ZBPYR）含藥血清對由N糖鏈抑制劑衣霉素（tunicamycin， Tm）引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響，以探討其神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 滋補(bǔ)脾陰方藥由清代吳澄《不居集》中資成湯加味而成，由紅參30 g，山藥15 g，茯苓15 g，白芍15 g，丹參12 g，白扁豆15 g，蓮肉20 g，石菖蒲10 g，遠(yuǎn)志10 g，檀香4.5 g，橘紅9 g，甘草9 g組成，均購自大連醫(yī)藥集團(tuán)藥材公司。中藥常規(guī)水煎，每毫升中藥液含生藥3.29 g，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2 主要試劑和儀器 達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基（Dulbecco's modified eagle's medium， DMEM)和胎牛血清，Gibco公司產(chǎn)品；胰蛋白酶和TRIReagent，Sigma公司產(chǎn)品；Tm，星形孢菌素（staurosporine， STS），日本W(wǎng)ako公司產(chǎn)品；細(xì)胞毒性檢測試劑盒，Roche公司產(chǎn)品；RNase OUT和Oligo (dt)，Invitrogen公司產(chǎn)品。二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱，Thermo Forma公司產(chǎn)品；臺式高速冷凍離心機(jī)，Sigma公司產(chǎn)品；UV754紫外分光光度計，上海分析儀器總廠產(chǎn)品；溫度梯度PCR擴(kuò)增儀，Thermo Hybaid公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀，美國BIOTEKTM公司產(chǎn)品；凝膠成像分析系統(tǒng)，UVP公司產(chǎn)品。
1.3 中藥血清制備 取健康雄性SD大鼠（220～250 g）12只，隨機(jī)分為對照組和ZBPYR組，每組6只。適應(yīng)飼養(yǎng)3 d后，ZBPYR組給予滋補(bǔ)脾陰方藥灌胃，10 ml/kg體質(zhì)量，此劑量灌胃2次/d，連續(xù)3 d；對照組給予等體積生理鹽水灌胃。于末次給藥后1 h腹主動脈取血，靜置2 h，2 000 r/min，4 ℃離心15 min分離血清，離心半徑為16.1 cm，56 ℃，30 min滅活。0.22 μm濾膜過濾除菌，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 Neuro2a細(xì)胞的培養(yǎng) 小鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞Neuro2a細(xì)胞株由日本北海道大學(xué)藥學(xué)部野村靖幸教授惠贈。細(xì)胞常規(guī)復(fù)蘇后加入培養(yǎng)液于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。細(xì)胞單層長滿后用終濃度為0.25%胰蛋白酶37 ℃條件下消化3 min，以1∶3傳代。培養(yǎng)液含90% DMEM、10%胎牛血清和1％雙抗。細(xì)胞長至第三代可以使用。
1.5 乳酸脫氫酶釋放試驗(yàn) Neuro2a細(xì)胞接種后分為對照組、10％空白血清組、5％ZBPYR組、10％ZBPYR組、15％ZBPYR組、Tm（5 μg/ml）組、10％空白血清＋Tm（5 μg/ml）組、5％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組、10％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組、15％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組。細(xì)胞單層長至70％時按以上分組給予相應(yīng)刺激。刺激后細(xì)胞放入5％CO2、37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h后用乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase， LDH）釋放試驗(yàn)檢測LDH泄漏率。LDH實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明執(zhí)行。LDH泄漏率為細(xì)胞上清中LDH活性與細(xì)胞總的LDH活性比值。LDH活性測定用酶標(biāo)儀于490 nm處檢測。另外Neuro2a細(xì)胞接種后分為對照組、STS（0.1 μmol/L）組、10％空白血清＋STS（0.1 μmol/L）組、15％ ZBPYR＋STS（0.1 μmol/L）組，待細(xì)胞單層長至70％時按以上分組給予相應(yīng)刺激。刺激后細(xì)胞放入5％ CO2、37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h后檢測LDH泄漏率。
1.6 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 實(shí)驗(yàn)分組同前。細(xì)胞單層長至90％時按以上分組給予相應(yīng)刺激。細(xì)胞放入5％ CO2、37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)6 h。總RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。（1）收集細(xì)胞用TRIReagent提取總RNA。用紫外分光光度計測定A260/A280，計算RNA濃度。（2）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)體系為20 μl。取2 μg總RNA，加二乙基焦磷酰胺（diethyl pyrocarbonate， DEPC）水至總體積為9 μl，加0.5 μl Oligo (dt) 1218引物混合后，置70 ℃變性10 min。然后加入下列成分：5×第一鏈緩沖液5.875 μl、10 mmol/L dNTP 2 μl、0.1 mol/L DTT 2 μl、RNase抑制劑0.5 μl和逆轉(zhuǎn)錄酶0.125 μl，混合使反應(yīng)總體系為20 μl。放入46 ℃反應(yīng)1.5 h，70 ℃變性15 min，冰上5 min后進(jìn)行擴(kuò)增。（3）PCR反應(yīng)。在0.2 ml PCR管中加入1.2 μl逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、sd H2O 9 μl、10 mmol/L dNTP 0.24 μl、10×PCR緩沖液1.2 μl、聚合酶0.12 μl、上游引物（20 μmol/L）0.12 μl、下游引物（20 μmol/L）0.12 μl，總反應(yīng)體系為12 μl。（4）PCR產(chǎn)物觀察。PCR產(chǎn)物經(jīng)40％丙烯酰胺凝膠電泳后，EB染色15 min，用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照及圖像分析，然后計算待測基因與內(nèi)標(biāo)磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase， GAPDH)吸光度的比值。PCR反應(yīng)擴(kuò)增參數(shù)如下：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78， GRP78），94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，循環(huán)22圈，72 ℃ 5 min；凋亡促進(jìn)因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CCAAT/EBP homologous protein， CHOP），94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，60 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，循環(huán)25圈，72 ℃ 5 min；GAPDH，94 ℃ 5 min，94 ℃ 40 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s，循環(huán)28圈，72 ℃ 5 min。引物序列見表1。
表1 引物序列（略）
Table 1 Sequence of the primers
1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次，圖像分析采用LabWorks 4.6專業(yè)圖像分析軟件。數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，兩組間差異比較采用t檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 LDH釋放試驗(yàn)檢測ZBPYR含藥血清對Tm刺激Neuro2a后LDH泄漏率的影響 各濃度含藥血清和10%空白血清組與對照組相比，LDH泄漏率差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，說明血清對Neuro2a細(xì)胞沒有毒性作用；Tm（5 μg/ml）組與對照組相比，LDH泄漏率明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；10％空白血清預(yù)處理組LDH泄漏率與Tm組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；而各濃度ZBPYR含藥血清預(yù)處理組與Tm組相比，LDH泄漏率下降明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。10％藥物血清預(yù)處理組與10％空白血清預(yù)處理組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1。
2.2 RTPCR方法觀察ZBPYR含藥血清對Tm刺激Neuro2a后GRP78 mRNA表達(dá)的影響 各濃度含藥血清和10%空白血清組與對照組相比，GRP78 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明血清對Neuro2a細(xì)胞GRP78 mRNA表達(dá)沒有影響；Tm（5 μg/ml）組與對照組相比，GRP78 mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)；而加入血清預(yù)處理1 h后再加入濃度為5 μg/ml Tm各組與Tm（5 μg/ml）組相比，GRP78 mRNA表達(dá)明顯下降(P＜0.05)，其中ZBPYR含藥血清預(yù)處理組GRP78 mRNA表達(dá)較空白血清預(yù)處理組GRP78 mRNA表達(dá)下降更加明顯(P＜0.05)。見圖2。
2.3 RTPCR方法觀察ZBPYR含藥血清對Tm刺激Neuro2a后CHOP mRNA表達(dá)的影響 各濃度含藥血清組與對照組相比，CHOP mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明血清對Neuro2a細(xì)胞CHOP mRNA表達(dá)沒有影響；Tm（5 μg/ml）組與對照組相比，CHOP mRNA表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）；10％空白血清預(yù)處理組與Tm（5 μg/ml）組相比，CHOP mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；而各濃度ZBPYR含藥血清預(yù)處理組CHOP mRNA表達(dá)與Tm（5 μg/ml）組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；10％藥物血清預(yù)處理組與10％空白血清預(yù)處理組相比，CHOP mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2。
圖1 LDH檢測Tm刺激細(xì)胞后各組細(xì)胞LDH泄漏率（略）
Figure 1 LDH leakage from each group treated by Tm
**P＜0.01， vs normal control group; P＜0.05， P＜0.01， vs Tmtreated group; P＜0.05， vs 10％ control serumtreated group (n=4 for each group).
圖2 RTPCR法觀察Tm刺激各組細(xì)胞后GRP78和CHOP mRNA表達(dá)（略）
Figure 2 Expressions of GRP78 and CHOP mRNAs in different groups treated by Tm (RTPCR)
Results of RTPCR electrophoresis from each group and values of IOD from each group (n=4 for each group). *P＜0.05， vs normal control group; P＜0.05， vs Tmtreated group; P＜0.05， vs 10％ control serumtreated group.
2.4 LDH釋放試驗(yàn)檢測STS刺激Neuro2a后LDH泄漏率的變化 STS 0.1 μmol/L組與對照組比，LDH泄漏率升高（P＜0.01）；而加入15％空白血清預(yù)處理組與STS組相比，LDH泄漏率下降（P＜0.05）；15％ ZBPYR含藥血清預(yù)處理組與STS組相比，LDH泄漏率下降（P＜0.01）；15％ ZBPYR含藥血清預(yù)處理組與15％空白血清預(yù)處理組相比LDH泄漏率下降更加明顯（P＜0.05）。見圖3。
圖3 LDH檢測STS刺激細(xì)胞后各組細(xì)胞LDH泄漏率（略）
Figure 3 LDH leakage from each group treated by STS
**P＜0.01， vs normal control group; P＜0.05， P＜0.01， vs STStreated group; P＜0.05， vs 15％ control serumtreated group (n=4 for each group).
3 討論
ERS是細(xì)胞的一種應(yīng)激反應(yīng)過程，糖饑餓、鈣平衡紊亂、糖基化抑制和二硫鍵合成減少等情況下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的微環(huán)境發(fā)生改變，蛋白質(zhì)的折疊受到影響，導(dǎo)致大量未折疊或錯誤折疊的蛋白質(zhì)堆積于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，由此引起一系列以分子伴侶和折疊酶表達(dá)上調(diào)為標(biāo)志的應(yīng)答反應(yīng)，稱為未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response， UPR）。通過UPR細(xì)胞才能在應(yīng)激情況下存活。分子伴侶GRP78與凋亡促進(jìn)因子CHOP是ERS時表達(dá)增多的兩種分子，被看作是ERS的標(biāo)志，在ERS中起著不同的作用。其中GRP78能保護(hù)細(xì)胞，而CHOP則是促進(jìn)細(xì)胞凋亡。因此通過藥物干預(yù)后研究它們的表達(dá)情況可以進(jìn)一步了解藥物對ERS的作用。AD是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，病理特征為淀粉樣蛋白的沉積、神經(jīng)原纖維纏結(jié)、tau蛋白異常磷酸化和區(qū)域選擇性神經(jīng)元死亡［1］。AD與基因突變有關(guān)，主要有編碼淀粉樣蛋白前體基因（amyloid protein precursor， APP）和早老素（presenilin， PS）基因，這些基因都與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有關(guān)。AD相關(guān)的早老素突變，誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)并且通過改變APP的蛋白水解加工作用而部分地增強(qiáng)對應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡的易損性。PS1突變通過細(xì)胞表面有活性的鈣離子流入的直接減少，不依賴APP，并間接地通過APP處理作用和淀粉樣肽的產(chǎn)生增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放來解除對神經(jīng)元鈣離子穩(wěn)態(tài)的控制。這種鈣離子穩(wěn)態(tài)的干擾將改變APP的加工，過量生成β淀粉樣蛋白142(amyloid βprotein 142， Aβ142)，同時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣失衡，激活鈣蛋白激酶，切割內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的caspase12，從而激活caspase12介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性凋亡路徑，最終形成AD的病理變化［2］。除了鈣離子失調(diào)，PS突變下調(diào)UPR并增強(qiáng)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的易損性［3］。PS1突變還誘導(dǎo)了一個內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中與應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑有關(guān)的凋亡前因子CHOP的表達(dá)［4］。PS是γ分泌酶復(fù)合物的一部分，與β分泌酶一起，裂解APP產(chǎn)生Aβ，并且PS突變增加總Aβ和Aβ142的產(chǎn)生。Aβ能直接引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣離子釋放并且誘導(dǎo)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和神經(jīng)毒性［5］。因而，在AD中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是引發(fā)和調(diào)節(jié)神經(jīng)元死亡的一個主要事件。現(xiàn)有研究顯示在AD神經(jīng)元死亡中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑相互影響，起著調(diào)控凋亡級聯(lián)反應(yīng)的作用［6］。中醫(yī)認(rèn)為人體的生長、發(fā)育和衰老與“腎”密切相關(guān)。“腎精虛衰”是衰老的主要原因。同時又認(rèn)為“脾胃為血?dú)怅庩栔佟保捌⑽讣群停淙藟郏黄⑽覆缓停淙素病保虼艘仓匾暦铕B(yǎng)脾胃精氣在延年中的作用［7］。老年癡呆發(fā)病于老年期。老年期脾胃氣衰，飲食減少，脾虛則化源不足，腦髓失養(yǎng)，神機(jī)失調(diào)而發(fā)為本病。因此脾虛是老年性癡呆的基本病機(jī)，脾的功能衰退在老年性癡呆發(fā)病過程中起著主導(dǎo)作用，并貫穿于全過程［8］。脾的生理功能是脾之陰陽共同作用的結(jié)果。脾陰是指存在于脾臟的陰液（包括血、津液和水谷精微等）和脾的物質(zhì)形態(tài)及其滋潤濡養(yǎng)功能。由于脾與大腦關(guān)系密切，脾陰虧虛嚴(yán)重影響大腦的意識、學(xué)習(xí)、思維、記憶和情緒等功能，導(dǎo)致一系列與腦相關(guān)的精神意識病證如意識不清、學(xué)習(xí)記憶能力下降和情緒失常等。因此，滋補(bǔ)脾陰應(yīng)當(dāng)是防治老年癡呆的一個重要措施。滋補(bǔ)脾陰方藥由清代吳澄《不居集》中資成湯加味而成，以人參補(bǔ)脾益氣生津，山藥益胃補(bǔ)脾養(yǎng)陰，白芍養(yǎng)陰緩急，丹參活血養(yǎng)血益陰，茯苓健脾安神益智等，共奏健脾益陰之效。本組以往的研究顯示，滋補(bǔ)脾陰方藥能通過改善老齡大鼠腦細(xì)胞線粒體膜Na+K+ATP酶、Ca2+Mg2+ATP酶活性，調(diào)節(jié)膜磷脂代謝障礙和修飾膜的作用［9］，以及延緩興奮性氨基酸受體N甲基D門冬氨酸（NmethylDaspartic acid， NMDA）受體、γ氨基丁酸（gammaaminobutyric acid， GABA）受體染色陽性神經(jīng)元在衰老過程中喪失，同時抑制神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein， GFAP）的表達(dá)，起到神經(jīng)保護(hù)、延緩腦衰老的作用［10］。本實(shí)驗(yàn)中Tm刺激Neuro2a細(xì)胞LDH釋放試驗(yàn)結(jié)果表明，在加入滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清預(yù)保護(hù)后，可以明顯降低Tm刺激細(xì)胞后的LDH泄漏率，結(jié)合RTPCR觀察到滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清預(yù)處理后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78及CHOP mRNA的表達(dá)受到抑制，兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果的同步性可以推斷滋補(bǔ)脾陰方藥具有抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用。STS刺激Neuro2a細(xì)胞LDH釋放試驗(yàn)結(jié)果表明，加入滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清預(yù)處理后，可以明顯降低STS刺激細(xì)胞后的LDH泄漏率（STS是線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)劑）。因而表明滋補(bǔ)脾陰方藥同時具有保護(hù)線粒體損傷的作用。以上的研究結(jié)果為滋補(bǔ)脾陰方藥應(yīng)用于臨床防治AD提供了依據(jù)。AD是一種常見的神經(jīng)退行性病變，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚無有效的治療手段，對社會和人們的生活造成嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。現(xiàn)有的研究表明，神經(jīng)元的凋亡在AD的發(fā)病過程中起著重要的作用。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑已被證明在AD的發(fā)病過程中起著協(xié)同作用。我們的實(shí)驗(yàn)證明，滋補(bǔ)脾陰方藥對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑具有雙重作用，因而有助于AD的防治，加之中藥治療有著毒副作用低、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)點(diǎn)，更易于為人們所接受。
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大膽運(yùn)用對比色
邀請函能讓賓客形成對婚禮的第一印象，因此，混合使用那些大膽的色彩，如艷粉、深藍(lán)或者是花式字體將會形成強(qiáng)烈的視覺沖擊力，帶來很不錯的效果。
添加3d效果
把這些現(xiàn)代元素注入婚禮邀請函中，讓它呈現(xiàn)出更多立體效果，如在卡片上點(diǎn)綴一些閃耀發(fā)光的心型裝飾物，或者用經(jīng)過特殊處理的鮮花裝扮邀請函，或者在卡片上添加綢緞的蝴蝶結(jié)等。
保留郵票
在邀請函上用一個特別的紀(jì)念郵票。譬如：有經(jīng)典圖案或是有代表意義的郵票，你們還可以利用相關(guān)網(wǎng)站，設(shè)計自己喜歡的郵票風(fēng)格。
親手制作地圖
制作一個手繪的個性化地圖，標(biāo)注出你們最中意的婚禮場地是個不錯的選擇，這樣，也可以大大節(jié)省制作成本。
我的未婚夫是個汽車發(fā)燒友，所以我決定把請柬做成賽車明信片的樣子。首先，我把汽車公路賽的示意圖印在上面，在上面標(biāo)出教堂和宴會的大概位置。在公路賽的起點(diǎn)，我和他分別被畫做賽車的車頭和車尾，經(jīng)過了一段短暫的路程，我們結(jié)合了，最終在終點(diǎn)站我們合并成為一輛漂亮完整的小汽車！
rachel XX.4.24
我們兩個都非常喜歡看電影，不如把我們的婚禮作為一場電影，而要吸引觀眾來看，就首先要他們看一下宣傳短片，然后如果他們喜歡才會買票來電影院觀看電影。
按照此思路，我們制作了一個dvd短片作為邀請函。我們將歷史上幾個最經(jīng)典的銀幕之吻刻錄其中，再配上一個我和他的熱吻。噢，其實(shí)我們并沒有吻上。接著，一個深沉的聲音響起來，如果你想看我們真正的熱吻，就快來參加我們的婚禮吧！短片最后的演職員表里是我們的名字、婚禮時間和地點(diǎn)等相關(guān)信息。
以電影票的形式制作了回函卡，上面留有空間可以寫下被邀請人的姓名；如果他確認(rèn)能來，就打一個v，并寫上會帶幾個人人參加。
mandy XX.10.11
我收藏了許多行李托運(yùn)標(biāo)簽用來制作美麗的邀請函，在標(biāo)簽上方的小孔上，用絲線將一片薄荷葉系在標(biāo)簽上，這樣的邀請函是不是很特別呢？
marsha XX.5.1
我和他第一次見面是在一個美麗的植物園，于是我決定就用這個主題來制作邀請函。我買來紙張，接著去那個小花園采來野花和小草，將它們制成標(biāo)本貼于紙上。當(dāng)然我不會忘了附上一小枝一串紅，那是我對每位嘉賓最真摯美好的祝福。
meredith XX.5.5
當(dāng)然，在邀請函上我也動了不少心思，每張邀請函都是我特別制作的。而后我買來漂亮的絲綢小盒子來放我的邀請函，每個盒子里還放了一小包花籽，還有一枝薰衣草。最終功夫不負(fù)苦心人，所有的嘉賓都非常喜歡我的小制作。我的幾位好朋友甚至把空盒子放在家里的展示柜里作為永久的紀(jì)念。
婚禮邀請函范文
送呈：xxx先生臺啟
公歷年月日
謹(jǐn)訂于（星期日）
農(nóng)歷年月日
為***先生和**小姐舉行結(jié)婚典禮敬備喜筵
關(guān)鍵詞：任務(wù)情境；創(chuàng)設(shè)原則；探究學(xué)習(xí)
在任務(wù)驅(qū)動教學(xué)法中，任務(wù)設(shè)計是核心，圍繞著任務(wù)而創(chuàng)設(shè)的情境是有效實(shí)施任務(wù)驅(qū)動的基礎(chǔ)。文章以計算機(jī)基礎(chǔ)教學(xué)為例，對任務(wù)情境創(chuàng)設(shè)進(jìn)行探討。
任務(wù)情境創(chuàng)設(shè)的原則
任務(wù)驅(qū)動教學(xué)的展開，起始于有效任務(wù)情境的設(shè)計。任務(wù)驅(qū)動式教學(xué)必須依賴于恰當(dāng)?shù)娜蝿?wù)情境才能調(diào)動學(xué)生的積極性，主動參與到任務(wù)的確立、分析等活動中，才能充分發(fā)揮學(xué)生的主體性，實(shí)現(xiàn)學(xué)生意義的建構(gòu)。要創(chuàng)設(shè)理想的任務(wù)情境，我們應(yīng)遵循以下幾個原則。
1.目標(biāo)性原則
任務(wù)情境與教學(xué)目標(biāo)相聯(lián)系。先選擇典型的教學(xué)內(nèi)容，然后根據(jù)教學(xué)目標(biāo)創(chuàng)設(shè)任務(wù)情境。
2.貼近生活原則
任務(wù)情境與現(xiàn)實(shí)生活相適應(yīng)。教師所創(chuàng)設(shè)的任務(wù)情境要適應(yīng)學(xué)生真實(shí)的生活環(huán)境，結(jié)合學(xué)生日常熟悉的生活情境，加強(qiáng)學(xué)習(xí)內(nèi)容與生活的聯(lián)系，調(diào)動學(xué)生主體性的積極發(fā)揮。
如創(chuàng)設(shè)“撰寫競選自薦信”、“制作個人簡歷”、“分析班級學(xué)期成績”及 “學(xué)校形象宣傳”等情境。
3. 貼近專業(yè)原則
任務(wù)情境與學(xué)生所學(xué)專業(yè)相適應(yīng)。教師所創(chuàng)設(shè)的任務(wù)情境要適應(yīng)學(xué)生所學(xué)的專業(yè)，關(guān)注行業(yè)，結(jié)合專業(yè)。 如 “制作動漫節(jié)邀請函”等任務(wù)情境。
4. 學(xué)生主體性原則
任務(wù)情境與學(xué)生已有知識經(jīng)驗(yàn)相聯(lián)系。從學(xué)生已有的知識結(jié)構(gòu)出發(fā)，把情境置于學(xué)生的最近發(fā)展區(qū)，使知識的學(xué)習(xí)過程形成階梯式的上升過程。如，創(chuàng)設(shè)“制作宣傳手冊”、“企業(yè)產(chǎn)品推介”等任務(wù)情境。
任務(wù)情境創(chuàng)設(shè)的步驟
貼近學(xué)生學(xué)習(xí)、生活及將來就業(yè)的場景進(jìn)行情境創(chuàng)設(shè)。以“制作校園動漫節(jié)邀請函”任務(wù)為例，任務(wù)情境的創(chuàng)設(shè)步驟如下：
1.根據(jù)學(xué)習(xí)目標(biāo)，分析任務(wù)內(nèi)容
本單元的學(xué)習(xí)目標(biāo)主要為郵件合并、頁眉頁腳設(shè)置、項目符號與編號設(shè)置。學(xué)習(xí)目標(biāo)的重點(diǎn)難點(diǎn)是郵件合并，郵件合并的主要功能是生成批量文檔。任務(wù)定位為批量文檔的生成。
2.結(jié)合學(xué)生生活（或?qū)I(yè)）， 分析任務(wù)形式
筆者所教班級專業(yè)為動漫專業(yè)，結(jié)合專業(yè)活動，將任務(wù)定位為“校園動漫節(jié)邀請函”。
3.結(jié)合已有知識，確定任務(wù)具體要求
學(xué)校將舉辦校園動漫節(jié)，現(xiàn)需要制作一批動漫節(jié)邀請函，并郵遞分發(fā)。
任務(wù)情境在教學(xué)實(shí)施中的效果
以制作校園動漫節(jié)邀請函為例。任務(wù)情境在教學(xué)實(shí)施中起到顯著的效果。
1.調(diào)動學(xué)生學(xué)習(xí)積極性
此任務(wù)情境把學(xué)生帶入真實(shí)場景。學(xué)生在教學(xué)過程中發(fā)揮主動性，以主人翁的身份，體驗(yàn)完整的工作過程――“資訊―計劃―決策―實(shí)施―檢查―評估”。首先，在老師的指導(dǎo)下，討論分析制作邀請函的格式和要求，明確任務(wù)；其次，完成任務(wù)；最后，通過檢查評估，修改完善作品。
2. 自主探究，培養(yǎng)學(xué)習(xí)能力
任務(wù)實(shí)施階段分為兩大階段，第一階段，因?qū)W生已具備一定的文檔編輯和格式設(shè)置能力，在原有知識的基礎(chǔ)上，通過自學(xué)及小組討論完成表-1中子任務(wù)（1）――制作邀請函文檔和子任務(wù)（3）――制作邀請函封面。第二階段，是新知識的學(xué)習(xí)。學(xué)生通過看書、查看教學(xué)視頻等學(xué)習(xí)資源，小組討論、自主探究郵件合并等知識技能，完成子任務(wù)（2） ――通過郵件合并生成批量邀請函及子任務(wù) （4） ――制作一批信封標(biāo)簽。培養(yǎng)了學(xué)生的探索和自學(xué)能力。
3.真正發(fā)揮學(xué)生在學(xué)習(xí)活動中的主動性
⒈ 封面 通常會展活動商務(wù)邀請函的封面會顯示此商務(wù)函的性質(zhì)。普通的商務(wù)邀請函（信）封面以會展活名稱、主題、主辦機(jī)構(gòu)、時間、地點(diǎn)五項內(nèi)容為主；而特殊的商務(wù)邀請函（信）。則在封面上只注明會展活動組織者或項目的名稱、收信機(jī)構(gòu)或人員的相關(guān)信息并注明“通知、特函、”等字樣。
⒉ 標(biāo)題 由會展活動名稱和“邀請函（書）或（信）”組成。
會展活動名稱可以分為三個部分：基本部分、限定部分和附屬部分。其中基本部分和限定部分構(gòu)成展覽會名稱的主體。例如：第十屆中國家電產(chǎn)品博覽會邀請函（信）、第十二屆中國國際機(jī)床機(jī)電展覽會邀請函（信）。
⒊ 稱呼 邀請函的發(fā)送對象有三類情況：
（1）發(fā)送到單位的邀請函，應(yīng)當(dāng)寫單位名稱。由于邀請函是一種禮儀性文書，稱呼中要用單稱的寫法，不宜用泛稱（統(tǒng)稱），以示禮貌和尊重。
（2）邀請函直接發(fā)給個人的，應(yīng)當(dāng)寫個人姓名，前冠“尊敬的”敬語詞，后綴“先生”、“女士”、“同志”等。
（3）網(wǎng)上或報刊上公開的邀請函，由于對象不確定，可省略稱呼，或以“敬啟者”統(tǒng)稱。
⒋ 正文 正文應(yīng)逐項載明具體內(nèi)容。
第一部分背景說明。寫明舉辦會展活動的背景和目的；
第二部分組織說明。對會展活動組織結(jié)構(gòu)的進(jìn)行介紹，包括的主辦者、協(xié)辦者、承辦者等；
第三部分是時間與地點(diǎn)。根據(jù)會展活動設(shè)定的舉辦日期、結(jié)束日期與舉辦城市、地點(diǎn)進(jìn)行描述。
第四部分是會展活動的具體內(nèi)容介紹。
主要包括了會展活動的展區(qū)劃分、展品設(shè)定、同期活動、展示服務(wù)、會展活動的特點(diǎn)、會展活動的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)內(nèi)容；第五部分聯(lián)絡(luò)信息。寫明聯(lián)系聯(lián)絡(luò)信息和聯(lián)絡(luò)方式，包括傳真、電話、郵箱、負(fù)責(zé)人等。結(jié)尾處也可寫“此致”，再換行頂格寫“敬禮”，亦可省略。
⒌ 回執(zhí) 回執(zhí)是被邀請方根據(jù)需要和可能而給予的一種反饋信息。通常會展活動的回執(zhí)內(nèi)容格式統(tǒng)一的會展組織者進(jìn)行制定。包括了：參與者單位信息、參與類型、具體展位或廣告位、會議活動預(yù)定事項、參與人員信息、參與時報到信息說明等。
⒍ 落款 會展活動邀請函的落款，通常是會展活動的組織機(jī)構(gòu)名稱加蓋相關(guān)印章。如果是多家機(jī)構(gòu)共同主辦或承辦，則由多家機(jī)構(gòu)共同簽名蓋章。以證明此邀請函（信）的真實(shí)性與合法性。同時注明邀請函（信）的制作時間。
